Misty Upham commence à jouer la comédie dès l'âge de treize ans, au sein d'une troupe de théâtre, à Seattle. Ce qui avait débuté comme une activité pendant les vacances, devient très vite une activité à plein-temps. A quatorze ans, Misty écrit, réalise de courts sketchs et se produit dans les tournées de la troupe dans le Nord-Ouest des Etats-Unis. Ensuite, tout en poursuivant ses années de lycée, la jeune fille continue de jouer dans divers troupes de théâtre.
En 2001, elle apparaît pour la première fois à l'écran dans Skins. Misty Upham y interprète une victime de violence domestique dans la Réserve d'indiens Pine Ridge. Puis, après quelques fictions télévisées et un petit rôle dans la comédie Expiration Date, elle est à l'affiche du film indépendant Frozen River (2008).